Ein neues System zur Bestimmung der Zellwachstumskinetik in 96 Well-Platten: General Cell Screening System (GCSS)

Zusammenfassung

Als Alternativen zu Tierversuchen bieten sich für viele Fragestellungen in vitro-Tests mit tierischen oder anderen Zellen an. 96 Well-Mikrotiterplatten erlauben eine große Anzahl von Versuchen unter gleichen Bedingungen (Zeit, Temperatur, etc.) durchzuführen. Die Quantifizierung solcher Tests erfolgt bisher anhand von indirekten Zellzahlbestimmungen oder direkter Zellzählung nach dem Absaugen der Zellen aus den Wells. Diese Methoden sind alle Endpunktbestimmungen und können daher nur einmal pro Platte durchgeführt werden. Sei es die Quantifizierung über den Einbau radioaktivmarkierter Nucleotide wie Thymidin (Hewlett G. et al., 1989), oder die Aktivitätsbestimmung von “Marker-Enzymen”, wie mitochondriale Dehydrogenasen mit MTT (Mosmann T., 1983), XTT (Paull K.D. et al., 1988), oder MTS (Baltrop J.A. et al., 1991) als chromogenem Substrat, wie Laktat-Dehydrogenase (Racher A.J. et al., 1990), wie Saure Phosphatase (Conolly D.T. et al., 1986) etc., erlaubt nur eine einzige punktuelle Momentaufnahme pro Platte, deren Ergebnis nicht nur von der vorhandenen Zellzahl, sondern auch vom Aktivierungsgrad der Zellen abhängig ist. Alle kinetischen Parameter und die gesamte Entwicklung des Versuches bis zum gemessenen Endpunkt bleiben bei diesen Methoden als “black box” verborgen.