In-vivo-Perfusion der Meerschweinchenleber mit Dehydroepiandrosteron und seinen Sulfoconjugaten

Zusammenfassung

Die Leberperfusion hat sich als wertvolle Methode zur Erforschung des Steroidmetabolismus erwiesen, insbesondere auch für Androgene (6, 9, 13, 14, 15). Vorliegende Ergebnisse berichten über je drei Perfusionen mit DHEA, DHEA-Sulfatid und DHEA-Sulfat. Unter Belassen der arteriellen Versorgung wurde die Perfusion der Leber in situ vorgenommen mit dem Vorteil apparativer Einfachheit. Im einzelnen wurde folgendermaßen vorgegangen: nach Abklemmen der V. cava inf. unter- und oberhalb der Leber und Katheterisieren des Zwischenstückes ließen sich jeweils 30 ml frischen Meerschweinchenblutes über die V. portae perfundieren. Die Hälfte des gewonnenen Perfusates wurde reinfundiert und gesondert aufgefangen. Das Infusatblut war mit 0,009 ¼g 7-Alpha-³H-DHEA, 0,0176 ¼g 7-Alpha-³H-DHEA-Sulfat bzw. 0,058 ¼g 7-Alpha-³H-DHEA-Sulfatid versetzt. Die Infusionsgeschwindigkeit betrug 5 ml/min, woraus sich eine Perfusionsdauer von max. 10 min ergab. 3 ml des jeweiligen Infusats, die beiden Perfusate und die homogenisierte Leber wurden wie folgt aufgearbeitet: Die Extraktion der freien Steroide erfolgte mit Chloroform, das Ausfällen des Eiweißes mit Äthanol rAceton. Zur Abtrennung der Sulfate wurden die gesamten Conjugate an DEAE-Sephadex chromatographiert. Die Lösungsmittelverteilung zwischen Chloroform und Bi-carbonat diente zur Trennung von Glucuronosiden und Sulfatiden. Die Reinigung der Conjugate erfolgte dünnschichtchromatographisch. Nach Solvolyse und enzy-matischer Hydrolyse ließen sich nach mehrfacher Chromatographie und Lokalisation mit Hilfe des Dünnschichtscanners LB 2720 (Lab. Prof. Berthold, Wildbad) die einzelnen Metaboliten im Packard Tricarb Spectrometer 314 EX quantitativ bestimmen.

Mit Unterstützung der Deutschen Forschungsgemeinschaft, Bad Godesberg.