Advertisement

Isolierung und Fraktionierung von Nukleinsäuren

  • Peter von Sengbusch

Zusammenfassung

Die Hauptprobleme bei der Gewinnung von Nukleinsäuren liegen im Aufschluß der Zellen und dem Abtrennen der Nukleinsäuren von zellulären Komponenten und assoziierten Proteinen. Neben der Abtrennung unerwünschter Komponenten ist darauf zu achten, daß die Nukleinsäuren selbst weitestgehend geschont werden, denn sie sind gegenüber Nuklease-einwirkungen und Scherkräften außerordentlich empfindlich. Die Zellen müssen als erstes aufgebrochen werden, wozu eine Reihe von Methoden zur Verfügung stehen: Einfrieren und Auftauen, Aufbrechen durch osmotischen Schock oder enzymatische Einwirkung, Behandlung mit lytischen Agentien, wie Detergentien u.a., sowie mechanische Zertrümmerung (Reiben im Homogenisator, Ultraschallbehandlung) u.a.

Preview

Unable to display preview. Download preview PDF.

Unable to display preview. Download preview PDF.

Literatur

  1. Blin, N., Stafford, D.W.: A general method for isolation of high molecular weight DNA from eucaryotes. Nucl. Acid Res. 3, 2303 (1976)Google Scholar
  2. Brown, D.D., Stern, R.: Methods of gene isolation. Annu. Rev. Biochem. 43, 667 (1974)PubMedCrossRefGoogle Scholar
  3. Bünemann, H., Müller, W.: Base specific fractionation of double stranded DNA: Affinity chromatography on a novel type of adsorbant. Nucl. Acid Res. 5, 1059 (1978)CrossRefGoogle Scholar
  4. Freifelder, D.: Physical biochemistry: applications to biochemistry and molecular biology. San Francisco: Freeman and Co. 1976Google Scholar
  5. Gierer, A., Schramm, G.: Infectivity of ribonucleic acid from tobacco mosaic virus. Nature (London) 177, 702 (1956)CrossRefGoogle Scholar
  6. Jam, S.J., Tsai, C.-C., Sobell, H.M.: Visualization of drug-nucleic acid interactions at atomic resolution. J. Mol. Biol. 114, 317 (1977)CrossRefGoogle Scholar
  7. Kohne, D.E.: Isolation and characterization of bacterial ribosomal RNA cistrons. Biophys. J. 8, 1104 (1968)PubMedCrossRefGoogle Scholar
  8. Marmur, J.: A procedure for the isolation of DNA from microorganisms. J. Mol. Biol. 3, 208 (1961)CrossRefGoogle Scholar
  9. Marmur, J., Doty, P.: Determination of the base composition of deoxyribonucleic acid from its thermal denaturation temperature. J. Mol. Biol. 5, 109 (1962)PubMedCrossRefGoogle Scholar
  10. Meselson, M., Stahl, W., Vinograd, J.: Equilibrium sedimentation of macromolecules in density gradients. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 43, 581 (1957)PubMedCrossRefGoogle Scholar
  11. Müller, W., Crothers, D.: Interactions of heteroaromatic compounds with nucleic acids. Eur. J. Biochem. 54, 267 (1975)PubMedCrossRefGoogle Scholar
  12. Radloff, R., Bauer, W., Vinograd, J.: A dye-buoyantdensity method for the detection and isolation of closed circular duplex DNA; the closed circular DNA in HeLa Cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 57, 1514 (1967)PubMedCrossRefGoogle Scholar
  13. Sobell, H.M., Tsai, C.-C., Jain, S.C., Gilbert, S.G.: Visualization of drug-nucleic acid interactions at atomic resolution. J. Mol. Biol. 114, 333 (1977)PubMedCrossRefGoogle Scholar
  14. Sueoka, N., Cheng, T.Y.: Fractionation of nucleic acids with methylated albumin column. J. Mol. Bid. 4, 161 (1962)CrossRefGoogle Scholar
  15. Tsai, C.-C., Jain, S.C., Sobell, H.M.: Visualization of drug-nucleic acid interactions at atomic resolution. J. Mol. Biol. 114, 301 (1977)PubMedCrossRefGoogle Scholar

Copyright information

© Springer-Verlag Berlin Heidelberg 1979

Authors and Affiliations

  • Peter von Sengbusch
    • 1
  1. 1.Fakultät für BiologieUniversität BielefeldBielefeld 1Deutschland

Personalised recommendations