in situ-Immunlokalisation

Zusammenfassung

Mit dem Aufkommen spezifischer Antikörper wurde der klassischen Histologie/Cytologie ein neues Werkzeug zur Identifikation verschiedenster Zell- und Gewebebausteine, insbesondere deren Proteinkomponenten, zur Verfügung gestellt. Daraufhin entwickelte sich ein Arbeitsgebiet, das je nach Autor unterschiedlich betitelt wird – meist mit Immunhistologie, Immunhistochemie oder Immuncytochemie. Obwohl die Begriffe implizieren, dass auf histologischer Ebene bzw. auf zellulärer Ebene gearbeitet wird, werden die Begriffe in der Literatur zumeist nicht streng voneinander getrennt verwendet. Sämtlichen Methoden dieser Branche ist die Art der Detektion relevanter Proteine gemein. Sie erfolgt unter Ausnutzung spezifischer Antigen-Antikörper-Bindungen. Daher wird im Folgenden zusammenfassend von in situ-Immunlokalisation die Rede sein. Die Auswertung erfolgt im Allgemeinen lichtmikroskopisch und/oder elektronenmikroskopisch, wobei sogar eine „gewisse“ Quantifizierung der relevanten Proteine möglich ist – sofern die Präparation es hergibt und die erforderliche mikroskopische Ausstattung inkl. adäquater Imagingsysteme vorhanden ist. Die Aufgabe des Antikörpers ist es – wie immer – sein spezifisches Antigen im Gewebe bzw. in/an der Zelle zu finden und zu binden. Damit allein ist es noch nicht getan, denn nackte Antikörper sieht man ja bekanntermaßen irrsinnig schlecht. Daher markiert man den Antikörper mit irgendetwas Wahrnehmbarem, worüber dann der Antigen-Nachweis erfolgt. Als Markierung kommen Fluorochrome und Enzyme sowie korpuskuläre Anhängsel zum Einsatz. Deren Visualisierung erfordert unterschiedliche Detektionssysteme. Fluorochrome absorbieren und emittieren Licht bestimmter Wellenlänge – folglich benötigt man ein Fluoreszenzmikroskop. Enzyme benötigen ein spezifisches Substrat, das nach seiner Umsetzung die relevanten Strukturen farblich markiert – hier ist lediglich ein Lichtmikroskop vonnöten, ebenso bei korpuskulären Markierungen, im Wesentlichen kolloidales Gold. Letzteres wird auch gern genutzt, um elektronenoptisch noch tiefere, subzelluläre Einblicke zu erhaschen.