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Sarkosyl-Elektrophorese

  • R. WestermeierEmail author
Chapter
Part of the Springer Reference Medizin book series (SRM)

Englischer Begriff

sarcosyl electrophoresis

Definition

Bei der Elektrophorese im Polyacrylamidgel in Gegenwart des anionischen Detergenz Sarkosyl wird – analog zur SDS-PAGE – eine Trennung von Protein-Detergenzkomplexen nach Molekülgrößen durchgeführt.

Physikalisch-chemisches Prinzip

Manche Formen von synthetischem  Erythropoetin (EPO) sind PEGyliert und werden deshalb nach einer SDS-PAGE und Western Blotting nicht mit der gleichen Empfindlichkeit detektiert wie EPO-Moleküle ohne PEG. Weil das Sarkosyl nur an den Proteinanteil und nicht an den Polyethylenglykolanteil von PEGylierten Proteinen bindet, kann man diese mit PEG modifizierten Proteine beim nachfolgenden Western Blotting mit Antikörpern gegen Erythropoietin detektieren. Diese Methode ersetzt bei bestimmten Fragestellungen die SDS-Polyacrylamidgel-Elektrophorese, denn SDS bindet sowohl an die Proteine als auch an die PEG-Reste; deshalb kann der generell verwendete Anti-EPO-Antikörper nicht mit den komplett mit SDS beladenen Molekülen interagieren.

Einsatzgebiet

Dopingkontrolle zur Unterscheidung des synthetischen Erythropoetin vom körpereigenen Hormon in Human-Urinproben.

Untersuchungsmaterial

Meist Humanurin

Instrumentalisierung

Ausrüstung für Polyacrylamidgel-Elektrophorese bestehend aus Horizontal- oder Minivertikalkammer, Blotting-System, Stromversorger, Umlaufthermostat und Chemilumineszenz-CCD-Kamerasystem.

Spezifizität

Hoch, weil es sich um ein immunanalytisches Verfahren handelt.

Sensitivität

Je nach verwendetem Chemolumineszenz-Substrat im Bereich niedriger Picogramm bis hoher Femtogramm.

Fehlermöglichkeit

Fehler bei der Elektrophorese können bei Verwendung von Fertiggelen minimiert werden. Für den Elektrotransfer bei Western Blotting können fertige Pufferkits eingesetzt werden.

Praktikabilität – Automatisierung – Kosten

Mehrschrittige Methode, Aufwand wie bei normalem Western Blotting. Bei der Verwendung von Fertigprodukten ist mit höheren Kosten zu rechnen.

Bewertung – Methodenhierarchie (allg.)

Sarcosyl-Elektrophorese ist eine Methode für biochemisch arbeitende Labors. Siehe auch  PEGylierte Proteine.

Literatur

  1. Reichel C, Abzieher F, Geisendorfer T (2009) SARCOSYL-PAGE: a new method for the detection of MIRCERA and EPO-doping in blood. Published online in Wiley Interscience, 16 Dec 2009. www.drugtestinganalysis.com.  https://doi.org/10.1002/dta.97

Copyright information

© Springer-Verlag GmbH Deutschland, ein Teil von Springer Nature 2019

Authors and Affiliations

  1. 1.FreisingDeutschland

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