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Mobilitäts-Verschiebung SDS PAGE

  • R. WestermeierEmail author
Chapter
Part of the Springer Reference Medizin book series (SRM)

Englischer Begriff

mobility shift SDS PAGE

Definition

Detektion von phosphorylierten Proteinen mittels Mobilitätsverschiebung in einer Phosphat-Affinität-SDS-PAGE.

Physikalisch-chemisches Prinzip

Bei der Herstellung eines Polyacrylamidtrenngels werden Manganchlorid-/Zinkchlorid-Teilchen mit einpolymerisiert. Während der SDS-Elektrophorese gibt es Wechselwirkungen zwischen phosphorylierten Proteinen und den in die Matrix einpolymerisierten Additiven. Nicht phosphorylierte Proteine wandern mit der normalen Geschwindigkeit, die phosphorylierten Proteine interagieren mit den „Phos-tags“ und wandern daher langsamer. Auf diese Weise trennen sich die phosphorylierten Proteine von den nichtmodifizierten Proteinen.

Einsatzgebiet

Bestimmung von Proteinphosphorylierungen.

Untersuchungsmaterial

Biologische Flüssigkeiten, Gewebeextrakte, Zelllysate.

Instrumentalisierung

Ausrüstung für Polyacrylamidgel-Elektrophorese bestehend aus Horizontal- oder Minivertikalkammer, Stromversorger, Umlaufthermostat.

Spezifizität

Hoch.

Sensitivität

Hängt von der Detektionsmethode ab: Milligramm bei Coomassie-Brilliant-Blau-Färbung bis Picogramm bei Silberfärbung.

Fehlermöglichkeit

Phos-tag-Acrylamid-Lösungen gibt es fertig zu kaufen. Die üblichen Fehler bei der Polymerisation von Gelen sind möglich.

Praktikabilität – Automatisierung – Kosten

Relativ einfache Methode, erheblich billiger als Massenspektrometrie.

Bewertung – Methodenhierarchie (allg.)

Die Mobilitäts-Verschiebung SDS PAGE ist eine Methode für biochemisch arbeitende Labors.

Literatur

  1. Kinoshita E, Kinoshita-Kikuta E, Takiyama K, Koike T (2006) Phosphate-binding tag, a new tool to visualize phosphorylated proteins. Mol Cell Proteomics 5:749–757CrossRefGoogle Scholar

Copyright information

© Springer-Verlag GmbH Deutschland, ein Teil von Springer Nature 2019

Authors and Affiliations

  1. 1.FreisingDeutschland

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