FormalPara Synonym(e)

Ficoll-Gradiententrennung

FormalPara Englischer Begriff

gradient centrifugation

FormalPara Definition

Trennung der mononukleären Zellen von den polymorphkernigen Zellen und Erythrozyten durch Separation mit einem hochmolekularen Polymer aus Saccharose und Epichlorhydrin.

FormalPara Physikalisch – chemisches Prinzip

Eine 1+1 mit einer physiologischen Pufferlösung verdünnte antikoagulierte Blutprobe wird über eine Schicht hochmolekularer Saccharose und Epichlorhydrin (Ficoll) geschichtet und zentrifugiert. Dabei kommen die sedimentierenden Zellen mit dem Polymer in Kontakt. Dies führt zu einer Verklumpung der Erythrozyten sowie zu einer Zunahme der Dichte der Granulozyten. Dies beschleunigt die Sedimentation dieser beiden Zellpopulationen. Nach Abschluss der Zentrifugation sind dann 3 Schichten erkennbar. Am Boden sind die Erythrozyten und Granulozyten, darüber die Polymerschicht und darüber die verbliebenen mononukleären Zellen und Thrombozyten.

FormalPara Einsatzgebiet

Separation der mononukleären Zellen zur

  • Typisierung in der Durchflusszytometrie

  • Anreicherung

FormalPara Untersuchungsmaterial

Antikoaguliertes peripheres Blut, Knochenmark.

FormalPara Spezifität

  • Wiederfindung: 60 ± 20 % Lymphozyten

  • Reinheit: 95 ± 5 % mononukleäre Zellen mit >90 % Vitalität, 3 ± 2 % Granulozyten, 5 ± 2 % Erythrozyten

FormalPara Fehlermöglichkeit

  • Glaswaren führen zu Verlusten.

  • Bei der Überschichtung darf die Probe sich nicht mit dem Polymer mischen.

  • Probe zu alt; Proben müssen so schnell wie möglich verarbeitet werden.

  • Polymer vor Einsatz nicht gut gemischt.

  • Polymer zu alt.

FormalPara Praktikabilität – Automatisierung – Kosten

Handmethode, nicht automatisierbar, geringe Kosten.

FormalPara Bewertung – Methodenhierarchie (allg.)

Standardmethode zur Anreicherung von mononukleären Zellen. Für die Typisierung von Lymphozyten und Leukämiezellen wird heutzutage die Gradiententrennung selten eingesetzt, da mit der Vollblutlyse eine Alternative zur Verfügung steht, bei der es zu keinem Verlust an Zellen kommt.