FormalPara Synonym(e)

Lowry-Methode der Proteinbestimmung

FormalPara Englischer Begriff

Lowry method

FormalPara Definition

Die Biuretmethode wird ohne Kaliumiodid im Reagens durchgeführt, so dass Cu2+ im Biuretkomplex in Cu+ übergeht. Parallel dazu findet die Reaktion (Oxidation) von Tyrosin-, Tryptophan- und Cysteinresten mit dem zusätzlichen Folin-Ciocalteu-Reagens (besteht aus Phenol- und Natronlauge sowie Phosphorwolframsäure und Phosphormolybdänsäure) statt. Durch Reduktion dieser beiden Säuren wächst die Empfindlichkeit 100-fach gegenüber der klassischen Biuretreaktion.

FormalPara Beschreibung

Die von Hartree (1972) und Lowry (1951)modifizierte Methode nach Folin-Ciocalteu (1927) erreicht eine Nachweisgrenze von 0,1–1 mg/L Protein. Da die Eichkurve nicht linear verläuft, die Färbung nicht sehr stabil ist und Proteine infolge ihrer differenten Anteile an Tyrosin-, Tryptophan- und Cysteinresten unterschiedliche Extinktionskonzentrationskurven aufweisen, ist die Anwendung dieser Methode durch den besser standardisierbaren Bicinchoninsäureassay und teilweise durch Farbstoffbindungsmethoden (z. B. Bromkresolgrünmethode) ersetzt worden.

FormalPara Methodik

Frisches Lowry-Reagens wird durch Mischen folgender Lösungen hergestellt:

  • 15 mL Stammlösung A (100 g Na2CO3 in 1 L 0,5 M NaOH)

  • 0,75 mL Stammlösung B (1 g CuSO4 × 5 H2O in 100 mL H2O)

  • 0,75 mL Stammlösung C (2 g K-Tartrat in 100 mL H2O)

1 mL Lowry-Reagens + 1 mL Proteinlösung 15 Minuten bei Raumtemperatur, 2 N Folin-Ciocalteu-Reagens mit H2O 1:10 verdünnen, davon 3 mL zusetzen, mischen und 45 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren. Fotometrie bei 650 nm.

FormalPara Kalibration

Mit Rinderserumalbumin.

FormalPara Störfaktoren

EDTA, Ammoniumsulfat, Triton X-100.

FormalPara Diagnostische Bedeutung

Nur noch verwendet zur Messung von Proteinlösungen aus Fraktionierungen oder Biopsien.