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Real-time PCR von Enterobacter sakazakii in Säuglingsanfangsnahrung

  • A. Lehmacher
  • M. Fiegen
  • B. Hansen
Article

Abstract:

Enterobacter sakazakii represents a rare opportunistic pathogen that causes a high mortality rate. Especially newborns are infected by contaminated infant formula. To reduce this risk, the EU directive 2073/2005 demands for the absence of the pathogen in 30 ×10 g infant formula.

We describe a PCR-/real-time PCR that specifically detected 32 E. sakazakii strains among 21 species of Enterobacteriaceae as well as contaminated specimens among 30 different brands of infant formula. This real-time PCR, performed after a selective enrichment of E. sakazakii, reduces the working time by 1 to 3 days in comparison to the detection methods recommended by the US Food and Drug Administration (FDA) and ISO/DTS 22964 that is still under revision. In contrast to the latter procedure, we detected contaminated specimens of infant formula by the use of the procedure described in this report and the FDA method.

Keywords:

Enterobactersakazakii real-time PCR 

Abbreviation:

DNA

Deoxyribonucleic acid

dNTP

desoxy-Nukleosidtriphosphate

ESIA

Enterobacter sakazakii identification agar

FAM

6-Carboxyfluorescein

KBE

Kolonie-bildende Einheiten

PCR

Polymerase Chain Reaction

rRNA

ribosomal ribonucleic acid

TAMRA

6-Carboxytetramethylrhodamin

Zusammenfassung:

Enterobacter sakazakii repräsentiert einen seltenen opportunistischen Erreger, der Infektionen mit hoher Mortalitätsrate hervorruft. Insbesondere Neugeborene erkranken durch kontaminierte Anfangsnahrung. Zur Risikominimierung fordert die EU-Verordnung 2073/2005 die Abwesenheit des Erregers in 30 ×10 g Säuglingsanfangsnahrung.

Ein PCR-/Real-Time PCR-Verfahren wird beschrieben, das zunächst mit 32 E. sakazakii -Stämmen und weiteren 20 Arten der Enterobacteriaceen geprüft und anschließend zur Untersuchung 30 unterschiedlicher Marken von Säuglingsanfangsnahrung verwendet wurde. Nach der Selektivanreicherung führt das Real-Time PCR-Verfahren zu einer Ersparnis von 1 bis 3 Arbeitstagen beim Nachweis von E. sakazakii im Vergleich zum Verfahren der amerikanischen Food and Drug Administration (FDA) und dem noch in Bearbeitung befindlichen Verfahren ISO/DTS 22964. Im Gegensatz zur letztgenannten Untersuchungsmethode erfolgten mehrere Positivnachweise mit dem hier beschriebenen Verfahren und dem der FDA.

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Copyright information

© Birkhäuser Verlag, Basel 2007

Authors and Affiliations

  1. 1.Institut für Hygiene und Umwelt, Abteilung Mikrobiologischer VerbraucherschutzHamburgGermany

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