Induced changes in phenolic acids and stilbenes in embryogenic cell cultures of Norway spruce by culture filtrate of Ascocalyx abietina

Abstract

The aim of this work was to identify whether the Ascocalyx abietina culture filtrate has the ability to induce changes in the contents of phenolic substances that might be indicative for the disease response of Norway spruce (Picea abies). We focused on the accumulation of soluble and cell wall-bound phenolics, stilbenes as well as extracellular peroxidase activities elicited in the embryogenic cell cultures of Norway spruce by A. abietina culture filtrate. Treatment of spruce cells with fungal culture filtrate (5 and 20% v/v concentrations) evoked an increase in the total contents of phenolic acids (represented by the sum of free, methanol soluble ester- and glycoside-bound phenolics and methanol insoluble cell-wall bound phenolic esters). The challenge with filtrate was in particular manifested in the increase (compared with the control) in the contents of cell wall-bound phenolic acids (by about 100 and 130% in 5 and 20% filtrate, respectively) and soluble phenolic glycosides (by 37 and 65% in 5 and 20% filtrate, respectively) already 6 h after filtrate addition. Significantly decreased concentrations of stilbene glycosides, isorhapontin, astringin and piceid, were determined in filtrate-treated spruce cell cultures 6 and12 h after filtrate addition. The culture filtrate did not influence significantly the extracellular peroxidase activity 12 h after filtrate addition. Reduced extracellular peroxidase activity at 24 and 48 h in treated cells and decline in the amounts of soluble phenolics coincided with the rate of browning of filtrate-treated cells.

Zusammenfassung

Das Ziel dieser Arbeit bestand in der Überprüfung, ob das Kulturfiltrat des Ascomyceten Ascocalyx abietina die Gehalte phenolischer Abwehrsubstanzen der Gemeinen Fichte (Picea abies) beeinflussen kann. Unser Augenmerk richtete sich auf die Anreicherung löslicher und zellwandgebundener Phenole, Stilbene, als auch extrazellulärer Peroxidaseaktivitäten, die in embryogenen Zellkulturen der Gemeinen Fichte durch das Kulturfiltrat des Pilzes induziert wurden. Die Behandlung der Fichtenzellen mit dem Filtrat (Konzentrationen von 5 und 20% v/v) bewirkte einen Anstieg des Gesamtgehalts der Phenolsäuren (repräsentiert durch die Summe der freien, methanollöslichen ester- und glycosidgebundenen Phenole sowie der methanolunlöslichen zellwandgebundenen Phenolester). Die Wirkung der pilzlichen Kulturfiltrate manifestierte sich insbesondere in einem Anstieg der Gehalte zellwandge-bundener Phenolsäuren (um etwa 100 bzw. 130% in den 5-und 20%-Filtraten) und löslicher Phenolglycoside (um 37 bzw. 65% in den 5- und 20%-Filtraten) bereits 6 h nach Zugabe des Filtrats. Signifikante Konzentrationsabnahmen der Stilbenglycoside Isorhapontin, Astringin und Piceid wurden in den filtratbehandelten Fichtenzellkulturen 6 und 12 h nach Zugabe festgestellt. Das Kulturfiltrat beeinflusste die extrazelluläre Peroxidaseaktivität 12 h nach Filtratzugabe nicht. Eine verminderte Aktivität extrazellulärer Peroxidasen 24 und 48 h nach Filtratzugabe und die Konzentrations-abnahme löslicher Phenole korrelierten mit dem Verbräunungsgrad der filtratbehandelten Fichtenzellen.