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Qualitative und quantitative Fluoreszenzmikrospektrographie mit dem Leitz-Mikrospektrographen

Qualitative and quantitative fluorescence cytophotometry at the Leitz-Microspectrograph

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Summary

The use and additional equipment of the Leitz-Mikrospectrograph for microspectrofluorometry and fluorescence cytophotometry are described in detail.

Fluorescence excitation with incident light together with the use of dichromatic beam splitters for optimum separation of the excitation beam from emitted radiation are the characteristic features of this instrument.

The fluorescence light is spectrally dispersed by a glass-prism (Special glass for visible light, quarz for UV).

A motor driven oscillating mirror moves along the spectrum and reflects the light of continuously changing wavelength on to the photo-cathode of the multiplier, that transfers the optical impulse into an electrical signal. The wavelength dependend change of spectral intensity is registered by a light beam oscillograph fitted with four fixed potentiometers indicating the 400, 500, 600 and 700 nm wavelength position by crosspoints with an oblique line drawn by the wavelength potentiometer, while the sixth potentiometer records the spectral curve.

Problems of spectral calibration and correction are discussed.

When the prism and the oscillating mirror are removed the instrument may be used as fluorescence cytophotometer. For this purpose of quantitative fluorescence cytophotometry a digital measuring unit with a print-out instrument is presented.

Zusammenfassung

Ausgehend vom Leitz-Mikrospektrographen wird gezeigt, wie dieses Gerät für mikrospektrofluorimetrische Untersuchungen und für die quantitative Fluoreszenzcytophotometrie ausgerüstet werden kann. Die im Zusammenhang mit der Anwendung des Gerätes auftretenden Fragen der Eichung und Korrektur der Spektralkurven werden erörtert.

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Sprenger, E., Böhm, N. Qualitative und quantitative Fluoreszenzmikrospektrographie mit dem Leitz-Mikrospektrographen. Histochemie 25, 163–176 (1971). https://doi.org/10.1007/BF00279114

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